Metoda
společenství pro kvantitativní určení obsahu delta-9-tetrahydrokannabinolu v
odrůdách konopí.
Rozsah
a oblast použití
Tato
metoda slouží k určení obsahu delta-9-tetrahydrokannabinolu (dále jen „THC“) v
odrůdách konopí (Cannabis sativa L.).
Podle potřeby je uplatňována podle
postupu A nebo B, které jsou zde popsány.
Metoda
je založena na kvantitativním určení delta-9-THC pomocí plynové chromatografie
(GC) po extrakci vhodným rozpouštědlem.1.1.
Postup
A
Postup
B
Odběr
vzorků
2.1. Vzorky
Postup
A: z porostu dané odrůdy konopí se odebere z každé vybrané rostliny část dlouhá
30 cm, která obsahuje nejméně jedno samičí květenství. Odběr vzorků se provádí
v období, které začíná 20. den po rozkvětu a končí 10. den po odkvětu, během
dne a při dodržení systematického postupu, který zajišťuje reprezentativnost
vzorků pro dané pole, avšak s výjimkou okrajů porostu.
Členské
státy mohou povolit odběr vzorků v období od rozkvětu do 20. dne po rozkvětu za
předpokladu, že u každé pěstované odrůdy se odeberou další reprezentativní
vzorky v souladu s prvním pododstavcem v období od 20. dne po rozkvětu do 10.
dne po odkvětu.
Postup
B: z porostu dané odrůdy konopí se odebere horní třetina každé vybrané
rostliny. Odběr vzorků se provádí v průběhu 10 dnů po odkvětu, během dne a při
dodržení systematického postupu, který zajišťuje reprezentativnost vzorků pro
dané pole, avšak s výjimkou okrajů porostu. V případě dvoudomých odrůd se
odebírají pouze samičí rostliny.
2.2. Velikost
vzorku
Postup
A: vzorek je tvořen částmi 50 rostlin na jedno pole.
Postup
B: vzorek je tvořen částmi 200 rostlin na jedno pole.
Každý
vzorek se umístí do plátěného nebo papírového pytle tak, aby se nerozdrtil, a
zašle se do laboratoře k analýze.
Členské
státy mohou stanovit, že se odebírá druhý vzorek pro případnou kontrolní
analýzu, který uschová buď producent, nebo subjekt odpovědný za analýzu.
2.3. Sušení
a skladování vzorků
Sušení
vzorků musí začít co nejdříve, v každém případě do 48 hodin a používá se
jakákoli metoda s teplotou nižší než 70 °C.
Vzorky
se usuší tak, aby měly stálou hmotnost a obsah vody mezi 8 % a 13 %.
SC9 002.21.2
Úřední věstník Evropské unie 2. 12. 2009
SC9 002.21.2
Úřední věstník Evropské unie 2. 12. 2009
Po
vysušení se vzorky bez rozdrcení uskladní v temnu při teplotě do 25 °
C.3.
Stanovení
obsahu THC
3.1. Příprava
zkušebního vzorku
Z
vysušených vzorků se odstraní stonky a semena větší než 2 mm.
Vysušené
vzorky se rozdrtí na středně jemný prášek
(skrze síto s oky o velikosti 1 mm).
(skrze síto s oky o velikosti 1 mm).
Prášek
lze skladovat 10 týdnů v temnu a suchu při teplotě do 25 °C.
3.2.
Činidla a
extrakční roztok
Činidla
—
delta-9-tetrahydrokannabinol,
čistý pro chromatografické účely, —
skvalen,
čistý pro chromatografické účely, jako vnitřní standardní vzorek.
Extrakční
roztok
—
35 mg
skvalenu na 100 ml hexanu.3.3.
Extrakce delta-9-THC
Extrakce delta-9-THC
Odváží
se 100 mg zkušebního vzorku rozmělněného na prášek, umístí se do odstředivkové
zkumavky a přidá se 5 ml extrakčního roztoku obsahujícího vnitřní standardní
vzorek.
Vzorek
se umístí do ultrazvukové lázně a ponechá se zde 20 minut.
Pět minut se odstřeďuje při 3 000 otáčkách za minutu a pak se odebere roztok THC plovoucí na povrchu.
Tento roztok se vstříkne do chromatografu a provede se kvantitativní analýza.
Pět minut se odstřeďuje při 3 000 otáčkách za minutu a pak se odebere roztok THC plovoucí na povrchu.
Tento roztok se vstříkne do chromatografu a provede se kvantitativní analýza.
3.4.
Plynová
chromatografie
Přístroje
—
plynový
chromatograf s plamenovým ionizačním detektorem a děleným/neděleným
vstřikovačem, —
kolona
umožňující dobré oddělení kanabinoidů, například skleněná kapilární kolona
dlouhá 25 m, o průměru 0,22 mm,
potažená
5 % nepolární fenylmethylsiloxanovou fází.
Rozsahy
kalibrace
Přinejmenším
tři body pro postup A a pět bodů pro postup B, včetně bodů 0,04 a 0,50
mg/ml-delta-9-THC v extrakčním roztoku.
Pokusné
podmínky
Jako
příklad pro kolonu uvedenou v bodu a) se uvádějí tyto podmínky:
—
teplota
v peci 260 °C, —
teplota
vstřikovače 300 °C, —
teplota
detektoru 300 °C.
Vstříknutý
objem: 1 μl
SC6
01/613L 2.12.2009 CS
Úřední věstník Evropské unie L 316/107